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LFB 染色即勞克堅(jiān)牢藍(lán)(Luxol Fast Blue)染色,是一種常用于顯示神經(jīng)組織中髓鞘結(jié)構(gòu)的染色方法,以下是關(guān)于它的詳細(xì)介紹:
染色原理:LFB 屬于銅 - 酞箐染料,是一種酒精溶性染料。髓鞘由髓鞘細(xì)胞和細(xì)胞膜組成,其成分主要是類脂質(zhì)和蛋白質(zhì),其中的脂蛋白與 LFB 染料發(fā)生酸 - 堿反應(yīng),脂蛋白堿基取代 LFB 染料的堿基,形成深藍(lán)色沉淀,從而使髓鞘著色。
染色步驟
石蠟切片脫蠟至水:將石蠟切片依次放入二甲苯中浸泡 20 分鐘,然后再放入第二個(gè)二甲苯中浸泡 20 分鐘,以充分脫蠟。接著,將切片放入無(wú)水乙醇中浸泡 10 分鐘,再放入第二個(gè)無(wú)水乙醇中浸泡 10 分鐘,之后依次放入 95%、90%、80% 和 70% 酒精中,每個(gè)濃度的酒精浸泡 5 分鐘,最后用蒸餾水進(jìn)行洗滌。
染色:將 0.1% 固藍(lán)溶液在 65℃烘箱提前預(yù)熱 30min,把脫蠟至水后的組織切片放入預(yù)熱的 0.1% 固藍(lán)溶液中,65℃染色 4 小時(shí),期間加蓋防止液體蒸發(fā)。
分化:室溫自然冷卻后取出切片,自來(lái)水洗至呈無(wú)色。隨后將切片迅速浸入 0.05% 碳酸鋰分化液中快速分化 5 秒,然后取出切片立即置于 70% 乙醇中快速分化 10 秒,可交替進(jìn)入 0.05% 碳酸鋰分化液和 70% 乙醇中進(jìn)行分化,及時(shí)鏡檢直至髓鞘呈藍(lán)色、背景無(wú)色,最后水洗終止分化。
脫水、透明與封片:切片經(jīng) 3 次無(wú)水乙醇脫水,每次 5 分鐘,再經(jīng)二甲苯透明 5 分鐘,最后用中性樹膠封片。
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